Contribution à l'étude expérimentale du rôle de la Tec et de la Btk dans la signalisation plaquettaire en aval de l'intégrine αIIbβ3

Abstract

La thrombine stimule les plaquettes par l'intermédiaire d'un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) activé par protéolyse ; ceci conduit à la phosphorylation sur tyrosine de nombreuses protéines de la signalisation, au nombre desquelles une protéine tyrosine-phosphatase cytosolique, la SHP-1. La(les) kinase(s) mise(s) en jeu dans cette voie n'est(ne sont) pour l'instant pas connue(s), et la compréhension des phosphorylations précoces ayant lieu en aval des RCPG reste un enjeu de la recherche dans le domaine de la signalisation cellulaire. La Tec et la Btk font partie du groupe récemment décrit des protéines tyrosine-kinases (PTKs) non-récepteurs contenant un domaine homologue de la pleckstrine (PH) ; elles constituent de très bons candidats à la phosphorylation de la SHP-1. Afin d'étudier leur(s) rôle(s) dans les plaquettes stimulées par la thrombine, nous les avons exprimées sous forme de protéines de fusion avec la GST. Celles-ci sont utilisées pour immuniser des lapins qui nous permettent de produire des anticoprs polyclonaux anti-tec et anti-Btk, utilisés en immunoprécipitation et en immuno-empreinte. Grâce à ces anticorps spécifiques, nous avons montré que la Tec et la Btk sont exprimées dans les plaquettes humaines et qu'elles sont phosphorylées sur tyrosine sous l'effet de la thrombine, selon une cinétique débutant à 1 min et atteignant un maximum à 3 min de stimulation. Le tétrapeptide RGDS inhibe très fortement leur état de tyrosine-phosphorylation et bloque leur translocation au cytosquelette. Ces résultats montrent que la Tec et la Btk sont impliqueés dans la signalisation plaquettaire en aval de l'activation de l'intégrine αIIbβ3, et qu'elles ne semblent pas mises en jeu dans la phosphorylation de la SHP-1.