Marquage histologique du chromosome Y chez le marmouset commun (Callithrix jacchus), petit primate non humain. Mise au point d’une sonde d’hybridation in situ en fluorescence pour le suivi tissulaire de greffes de cellules à potentiel neurogénique.

Abstract

Notre travail s’inscrit dans un projet d’étude de médecine régénérative dans le cadre d’atteintes cérébrales, tel que l’accident vasculaire cérébral. Ce projet a besoin d’un essai sur le modèle animal qu’est le marmouset commun (Callithrix jacchus). Dans une première partie, nous présentons d’abord les différents types de cellules souches existantes ainsi que leurs applications en médecine régénérative. Nous exposons ensuite les capacités des cellules souches embryonnaires qui seront utilisées dans le projet. Puis nous développons les différentes méthodes de suivi cellulaire utilisables et expliquons le choix de l’hybridation in situ en fluorescence. Pour finir cette première partie, nous expliquons l’intérêt du modèle marmouset en recherche dans le cadre de ce projet, ainsi que le choix du suivi des chromosomes sexuels. Dans une deuxième partie, nous décrivons d’abord les protocoles expérimentaux permettant la création des sondes chromosomiques spécifiques aux chromosomes X et Y. Ces sondes sont ensuite testées sur des cellules en métaphase isolées puis sur des coupes de tissus. Ces sondes, après quelques modifications du protocole expérimental, permettront de différencier une cellule mâle d’une cellule femelle sur une lame histologique. Il sera donc possible de suivre un implant de cellules mâles chez un individu receveur femelle grâce à une méthode de suivi par FISH.