Contribution à l’identification des cellules souches mésenchymateuses de la moelle osseuse : validation de protocoles d’immunohistochimie sur os décalcifiés

Abstract

L’étape de décalcification est une étape critique lors de l’étude histologique de la moelle osseuse, en particulier pour la réalisation des marquages d’immunohistochimie. Dans cette étude nous réalisons une présentation des techniques actuelles de décalcification, et nous proposons d’adapter des protocoles de décalcification douce autorisant ensuite les marquages immunohistochimiques. Cette étude est centrée sur l’identification et la caractérisation des cellules souches mésenchymateuses natives de la moelle osseuse d’os décalcifiés humains et murins. Les marqueurs immunohistochimiques CD45, CD34, CD3, αSMA et Ki-67 sur moelle osseuse murine et les marqueurs immunohistochimiques CD34, vimentine, CD200 et αSMA sur moelle osseuse humaine, sont validés après décalcification par l’EDTA. Les marqueurs immunohistochimiques CD45 et CD34 sont également validés sur moelle osseuse murine après décalcification électrolytique. Ces méthodes s’appliquent à des coupes histologiques fixées au formol et incluses en paraffine. Cette étude propose également différentes approches pouvant permettre la décalcification d’une structure calcifiée particulière : la dent.