Étude de l’effet du colorant et du dilueur sur la viabilité et le pourcentage d’anomalies morphologiques de spermatozoïdes frais de taureaux

Abstract

La morphologie ainsi que le pourcentage des spermatozoïdes morts dans de la semence fraîche de taureau de monte naturelle ou d’insémination est reliée à sa fertilité. De nombreuses techniques de coloration existent, dont l’éosine-nigrosine, qui permet une lecture simultanée du pourcentage de spermatozoïdes morts et du pourcentage d’anomalies morphologiques. Le but de notre étude était d'évaluer l’effet du dilueur et du colorant sur le pourcentage de spermatozoïdes morts et d’anomalies morphologiques lors de l'examen de la semence fraiche de taureau afin de proposer au praticien des outils adaptés aux conditions du terrain. La semence issue de taureaux producteurs de semence a été diluée avec de l’Optidyl® ou un tampon phosphate (PBS), puis colorée avec de l’éosine-nigrosine du commerce : Kit Vita Eosine (KVE) ou Sperm VitalStain (VitalStain). Les pourcentages de spermatozoïdes morts et d’anomalies morphologiques sont ensuite obtenus par lecture (200 spermatozoïdes par lames) au microscope optique de 2 lames par 2 opérateurs d’expérience différente (n=256). Le couple KVE-PBS surestime significativement le pourcentage de spermatozoïdes morts par rapport aux autres couples. Cependant même si une dilution à l’Optidyl® semble donner des résultats plus satisfaisants, la lecture du couple PBS-VitalStain est beaucoup plus aisée et donc plus rapide, et pourrait contribuer à limiter les erreurs de lecture. Nous avons mis en évidence la présence artéfactuelle de queues repliées ou enroulées à l’extrémité lorsque les lames sont colorées au KVE. Pour les anomalies majeures et le reste des anomalies mineures, le dilueur et le colorant n’ont pas d’effet significatif. Nous n’avons pas mis en évidence d’effet de l’expérience du lecteur de lame. Finalement, deux couples peuvent être utilisés sur le terrain : VitalStain-PBS si l’on recherche la facilité de lecture (confirmation de stérilité par exemple), et VitalStain-Optidyl si l’on recherche l’exactitude du résultat (dans le cas d’expertise par exemple).