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Analyse par les approches de la génomique fonctionnelle de l'induction de la polarité embryonnaire chez le tournesol

Tamborindeguy, Cécilia. Analyse par les approches de la génomique fonctionnelle de l'induction de la polarité embryonnaire chez le tournesol. PhD, Institut National Polytechnique de Toulouse, 2004

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Official URL: http://ethesis.inp-toulouse.fr/archive/00000147/

Abstract

L'embryogenèse dicotylédone débute par une division asymétrique qui est à l'origine du suspenseur et de l'embryon. Les méthodes classiques de mutagenèse mises en oeuvre pour élucider les mécanismes de ce processus développemental ne sont pas adaptées pour mettre en évidence les mécanismes d'acquisition de la polarité embryonnaire à l'origine de cette division asymétrique. L'embryogenèse somatique est reconnue comme un modèle d'étude de l'embryogenèse zygotique chez les végétaux supérieurs. Notamment, le modèle d'embryogenèse somatique in vitro du tournesol a été proposé comme modèle d'étude de la première division du zygote. Dans ce modèle, un protoplaste de tournesol mis en culture enrobé dans une matrice d'agarose (condition embryogène) se divise asymétriquement donnant une structure appelée embryoïde alors que lorsqu'il est mis en culture en milieu liquide (condition non-embryogène), il se divise de façon symétrique pour donner un tissu somatique. Nous avons construit des banques d'ADNc à partir de la culture de protoplastes en conditions embryogènes et non-embryogènes. Une banque de référence et une banque enrichie en gènes faiblement exprimés ont été construites pour chacune de ces conditions, générant un total de 22 876 clones d'ADNc dont 4 800 ont été séquencés. L'analyse de ces banques nous a permis d'effectuer une première caractérisation du transcriptome des protoplastes en culture en conditions embryogènes et non-embryogènes. Ces banques ont par la suite permis la construction de microarrays sur nylon. Les puces à ADN ont été hybridées avec des ADNc issus des deux conditions étudiés (protoplastes en culture en conditions embryogènes et en culture en conditions non-embryogènes), ainsi qu'avec des ADNc issus de protoplastes fraîchement isolés et de protoplastes fraîchement inclus. L'analyse des microarrays nous a permis d'identifier 369 gènes différentiellement exprimés entre au moins deux conditions. L'analyse du profil d'expression de ces gènes nous a permis de dégager des hypothèses sur les mécanismes d'induction de la polarité embryonnaire faisant intervenir l'hormone auxine, un signal calcique et la sécrétion de composés pariétaux.

Item Type:PhD Thesis
Uncontrolled Keywords:
Institution: Université de Toulouse > Institut National Polytechnique de Toulouse - INPT
Laboratory name:
Research Director:
Gentzbittel, Laurent
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